마이코박테리움 오리기스(Mycobacterium orygis)의 출현

이 기사 인용

마이코박테리움 오리기스(Mycobacterium orygis)로 인한 결핵은 인도 서부 야생동물 보호구역의 얼룩사슴 2마리와 인도 중부 국립공원의 인도들소 1마리에서 발견되었습니다. 인간-가축-야생동물 접점에서 결핵균 복합체의 역학을 명확히 하기 위해 전국적인 감시가 시급히 필요합니다.

Mycobacterium orygis로 인한 결핵(TB)은 인도의 인간, 소, 드물게 야생 동물에서 보고되었습니다(1-3). 우리는 2016년 2월부터 2020년 3월까지 질병 조사의 일환으로 선별된 설명할 수 없는 사망 85명 중 야생 동물에서 M. orygis 관련 결핵 3건을 보고합니다. 결핵 또는 엠. 보비스(n = 29), 해충성 폐렴(n = 9), 진균 육아종(n = 6) 및 신생물(n = 6).

2016년 2월, 인도 서부 구자라트주 기르나르 야생동물 보호구역에서 성체 방목 얼룩사슴 2마리(수컷[사례 1], 암놈[사례 2])가 죽은 채 발견되었습니다. 사후 검사 결과, 폐 실질에 박혀 있는 불균일하고 다초점이며 합쳐진 담황색 결절이 케이스화된 황백색 물질과 비대해진 간 및 표면 결절이 있는 장간막 림프절로 나타났습니다. 2017년 1월, 인도 중부 마디아프라데시주 반다브가르 국립공원에서 수척한 성체 수컷 들소(사례 3)가 죽은 채 발견됐다. 사슴과 유사하게 들소는 내장 흉막, 표면 폐 실질 및 폐 림프절에 다양한 크기의 흰색 케이스 결절을 가지고 있었습니다.

원인 물질을 조사하기 위해 폐, 간 및 림프절의 조직을 얼음과 10% 중성 완충 포르말린 위에 수집하고 조직병리학, Ziehl-Neelsen 염색 및 배양 분리를 위해 처리했습니다. 이들 조직에 대한 조직병리학적 검사에서는 광범위한 건성 괴사와 상피 세포, 림프구, 거대 세포 및 섬유아세포(3번 사례에서 가장 풍부함)로 둘러싸인 여러 석회화 부위가 있는 큰 육아종이 나타났습니다. 항산성 간균은 세포외 및 대식세포 내 모두에서 풍부했습니다(50-75/오일 침지장). 우리는 모든 샘플을 글리세롤이 포함된 Löwenstein-Jensen 배지와 피루브산 나트륨이 포함된 Löwenstein-Jensen 배지에서 3회 배양했는데, 이는 촉촉하고 매끄럽고 과립형 콜로니를 나타냈습니다(4). Mycobacterium 속에 특이적인 16S rRNA와 MTBC 구성원에 특이적인 MPB70 유전자를 표적으로 하는 단일 튜브 다중 PCR을 통한 박테리아 분리물의 1차 스크리닝을 통해 분리물이 MTBC라는 것이 확인되었습니다(5). 우리는 공개된 프라이머(6)를 사용하여 게놈 차이 영역(RD4 및 RD9)의 존재 여부를 확인하기 위해 MTBC 양성 샘플에 대해 추가 PCR을 수행했습니다. 이 테스트는 RD9의 부재와 RD4의 존재를 나타냈고, 따라서 3개 사례 모두에서 M. tuberculosis, M. canetti, M. bovis 또는 M. bovis BCG의 가능성을 배제했습니다.

관련 MTBC의 정확한 종과 인도에서 순환하는 가축 및 인간에 영향을 미치는 계통과의 유전적 유사성을 확인하기 위해 Illumina MiSeq 플랫폼(https://www.illumina.com)에서 쌍방향 전체 게놈 시퀀싱을 수행했습니다. M. orygis에 대한 표준 유전자 마커(RD1, RD4 및 Rv044c)의 존재와 RD9 및 RD12의 부재로 인해 우리의 서열이 M. orygis로 확인되었습니다. 우리는 생성된 전체 게놈 데이터를 미국 국립 생명공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information Sequence Read Archive) 데이터베이스에 등록 번호로 제출했습니다. SRX15482219(케이스 1), SRX6969199(케이스 2) 및 SRX6969201(케이스 3).

수치

수치. 새로 염기서열이 분석된 Mycobacterium orygis 야생 동물의 계통발생은 인도의 3가지 야생 동물(검은 별, 들소, 푸른 별, 사슴)에서 분리되었으며 참조 서열입니다. 바깥쪽 원은 다음의 분포를 보여줍니다.

우리는 이 연구에서 생성된 서열을 다른 이용 가능한 M. orygis 서열과 계통발생학적으로 비교했습니다. 계통발생적 분지 패턴은 사례 1의 점박이 사슴의 분리물이 사례 2의 사슴 분리물(그림)보다 들소(사례 3)에서 회수된 분리물에 유전적으로 더 가깝다는 것을 시사합니다. 본 연구에서 분리된 모든 균주에 대한 평균 쌍별 차이는 272였습니다. 격리된 개체 사이에는 73이 있었습니다. 자유 생활 야생 동물 중에서 회수된 것을 포함하여 새로 기술된 몇몇 분리물에서 관찰된 제한된 다양성은 주목할 만하며 향후 조사가 필요합니다.